低温物理参考文献的写法（低温物理参考文献的

基本原理由于微生物具有易变异的特性，在保存过程中，微生物的代谢必须处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定时间内不发生变异地维持生活能力。 由于低温、干燥、空气阻隔是降低微生物代谢能力的重要因素，菌种保藏的方法很多，设计就是基于这三个因素。 保存方法1 )传代培养保存法还有斜培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等，后者用于保存厌氧菌。 培养后在4—6冰箱内保存。 2 .液体石蜡包膜保存法是传代培养的方法，可适当延长保存时间。 斜面培养物和穿刺培养物上覆盖灭菌液体石蜡，既能防止培养基水分蒸发导致菌种死亡，又能阻止氧进入，减弱代谢作用。 3 .载体保存法是将微生物吸附在合适的载体如土壤、砂子、硅胶、滤纸上，然后干燥的保存方法，如泥沙保存法和滤纸保存法应用相当广泛。 4 .寄主保存方法用于目前无法在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次体、螺旋体等，它们在一定生活的动物、昆虫、鸡胚内感染传代。 该方法相当于一般的微生物传代培养保存法。 病毒等微生物也可以用液氮保存法或冷冻干燥保存法等其他方法保存。 5 .冷冻保存法可分为低温冰箱(-20—-30、-50—-80)、干冰酒精速冻(约-70)、液氮(-196)等保存法。 6 .冷冻干燥保存法将微生物超低温(-70左右)快速冷冻后，减压下利用升华现象去除水分(真空干燥)。 有些方法如滤纸保存法、液氮保存法、冷冻干燥保存法等，需要用保护剂制备细胞悬液，以防止冻结和水分升华对细胞的损害。 保护性溶质可以通过氢和离子键对水和细胞的亲和性来稳定细胞成分的配置。 保护剂有牛奶、血清、糖类、甘油、二甲基亚砜等。 器材、酵母菌、放线菌、霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培养基、灭菌脱脂牛奶、灭菌水、化学纯液体石蜡、甘油、五氧化二磷、河砂、瘦黄土或红土、冰、食盐、干冰、酒精95%、盐酸10%、无水氯化钙； 灭菌移液管、灭菌滴管、灭菌培养皿、管状安瓿管、泪滴形安瓿管(颈球形底)、40目和100目筛、油纸、滤纸条(0.51.2cm )、干燥器、真空泵、真空液氮冻存仪操作规程各保存法的应用范围和优缺点以下各法可根据实验室具体条件和需要进行选择。 1 )采用斜面低温保存法将菌种接种在合适的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，用油纸包裹棉塞部分，移入2—8冰箱保存。 保存期因微生物类型而异，霉菌、放线菌、芽孢细菌保存2-4个月，移植一次。 酵母菌最好两个月，细菌最好每月移植一次。 该方法是实验室和工厂菌种室常用的保藏方法，具有操作简单、使用方便、不需要特殊设备，即可随时检测保藏菌株是否死亡、变异和杂菌污染等优点。 缺点是易变异，培养基的物理化学特性并不严格固定，多次传代会改变微生物代谢，影响微生物性状； 污染杂菌的机会也很多。 2 .液体石蜡保藏法(1)将液体石蜡分装于三角烧瓶内，加盖棉塞，用牛皮纸包裹，1.05 kg/cm2，121.3灭菌30分钟，放入40温箱，蒸发水蒸气备用。 )将需要保存的菌种在最佳斜面培养基上培养，得到结实的菌体或孢子。

)用灭菌吸管吸取灭菌后的液体石蜡，注入菌生长的斜面。 其使用量以距离斜面前端1cm为基准，将菌种与空气隔绝。 )4)试管直立，低温或室温保存)有些微生物在室温下保存时间比冰箱保存时间长。 该方法实用有效。 霉菌、放线菌、芽孢杆菌不灭2年以上，酵母菌可保存1-2年，一般无芽孢杆菌可保存1年左右。 即使是普通方法难以保存的脑膜炎球菌，也可以在37的培养箱中保存3个月。 该方法的优点是制作简单，不需要特殊设备，且不需要频繁移植。 缺点是保存时必须直立放置，所占位置大，同时携带也不方便。 液体石蜡下取培养物移植后，接种环在火焰上灼烧时，培养物易随残留液体石蜡飞溅，需特别注意。 3 .滤纸保存法(1)将滤纸切成0.51.2cm小条，放入0.68cm安瓿管中，每管1-2片，棉塞，在1.05kg/cm2、121.3灭菌30分钟。 )将需要保存的菌种在合适的斜面培养基上培养，使其充分生长。 )3)取灭菌脱脂牛奶1—2ml，滴加到灭菌培养皿或试管内，取几次环状菌苔在牛奶内混合，制成浓稠悬浮液。 )4)用灭菌镊子从安瓿管上取下滤纸条浸入菌悬液内，吸饱后放回安瓿管，盖上棉塞。 )5)在加入五氧化二磷作为吸水剂的干燥器中放入安瓿管，用真空泵抽吸至干。 )6)管路中装棉，火焰封装，低温保存。 )需要使用菌种时，将安瓿头部置于火焰上加热，滴一滴冷水，在加热的部分使玻璃破裂，用镊子敲掉口边的玻璃，安瓿头部打开后取出滤纸，放入液体培养基中，在培养箱中培养。 细菌、酵母菌、丝状真菌均可采用该方法保存，前两种可保存2年左右，部分丝状真菌可保存14—17年。 该方法比液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。 4 .泥沙保存法(1)取河砂加入稀盐酸10%，加热煮沸30分钟去除有机质。 )2)倒入酸水，用自来水冲洗至中性。 )3)干燥，用40目筛子过筛，去除粗粒，备用。 )4)另取不含非耕作层腐殖质的贫瘠黄土或红壤，加入自来水浸泡洗涤数次至中性。 （

文章来源：《低温物理学报》 网址: http://www.dwwlxbzz.cn/zonghexinwen/2022/1212/613.html